在干細(xì)胞療法及藥物發(fā)現(xiàn)等研究領(lǐng)域，三維(3D)細(xì)胞培養(yǎng)越來(lái)受到人們的關(guān)注。然而，3D細(xì)胞培養(yǎng)的準(zhǔn)備工作可能很困難，并且移液技術(shù)不良可能導(dǎo)致在3D細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中產(chǎn)生巨大差異。Picus® Nxt移液器能夠使樣品制備的工作流程標(biāo)準(zhǔn)化并消除因個(gè)人移液操作導(dǎo)致的潛在負(fù)面影響，是水凝膠制備的理想選擇。

移液技術(shù)不良會(huì)導(dǎo)致樣品和實(shí)驗(yàn)間的重復(fù)性低。制備過(guò)程中所使用的水凝膠、移液器及吸頭會(huì)使3D細(xì)胞培養(yǎng)物的制備具有挑戰(zhàn)性，并且容易產(chǎn)生差異，但重要的影響因素是個(gè)人的移液操作。通過(guò)使用電動(dòng)移液器，您可以用預(yù)設(shè)好移液速度和混合步驟的方案，盡可能減少因個(gè)體移液操作引入的差異。

材料和方法

細(xì)胞混合物制備

使用Picus® Nxt賽多利斯電動(dòng)移液器、賽多利斯Safetyspace™濾芯吸頭、賽多利斯Optifit吸頭、GrowDex®水凝膠混合制備細(xì)胞混合物。

GrowDex®定量

通過(guò)熒光增白劑染色法對(duì)GrowDex®進(jìn)行定量。

活細(xì)胞定量

使用基于甲臜的檢測(cè)方法對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)中的活細(xì)胞進(jìn)行定量。

結(jié)果

充分混合可以改善 3D 細(xì)胞培養(yǎng)的結(jié)果

當(dāng)使用Picus® Nxt移液器以中等混合速度（速度5）混合30 - 40次（圖 1）來(lái)制備并移取 GrowDex®混合物時(shí)，3D 細(xì)胞培養(yǎng)重復(fù)操作之間的變異系數(shù)（CV%）低。按照該工作流程，當(dāng)移取 100 μL 至 96 孔板時(shí)，CV< 3%。

另一方面，不細(xì)心的混合操作可能會(huì)產(chǎn)生氣泡和泡沫，從而導(dǎo)致細(xì)胞數(shù)量變化增大，且細(xì)胞活力降低（圖2）。同樣地，混合操作不嚴(yán)謹(jǐn)也會(huì)導(dǎo)致終樣品中水凝膠含量出現(xiàn)很大 差異（圖 3）。

推薦使用賽多利斯 Safetyspace™濾芯吸頭進(jìn)行3D細(xì)胞培養(yǎng)的移液

建議在細(xì)胞培養(yǎng)應(yīng)用中使用賽多利斯Safetyspace™濾芯吸頭，因?yàn)闉V芯能夠降低交叉污染的風(fēng)險(xiǎn)。

使用單道Picus® Nxt 300 移液器將GrowDex®稀釋液移取到 384 孔板上，過(guò)程中采用帶孔板跟蹤功能的多次分液模式（10 × 30 μL），以防止移液到錯(cuò)誤的孔中（圖 4）。使用同一個(gè)吸頭進(jìn)行總共 176 次重復(fù)移取。將 Safetyspace™吸頭與低吸附Safetyspace™吸頭進(jìn)行比較。作為參考，使用低吸附Safetyspace™吸頭移取 10% FBS-RPMI。

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